网站首页 >> 新品发布 >> AxyPrep 质粒大量试剂盒
Brand agent
品牌代理
为客户提供最优质的产品和服务
销售热线：021-34687452
AxyPrep 质粒大量试剂盒

AxyPrep 质粒大量试剂盒

本试剂盒采用改进的SDS 碱裂解法，结合DNA 制备膜选择性地吸附DNA 的方法达到快速纯化质粒DNA 的目的。适合于从120-300 ml 细菌培养物中提取多至500 μg 高纯的质粒DNA，用于测序、体外转录与翻译、限制性内切酶消化、细菌转化等分子生物学实验。
￥ 0.00
0.00
  
本试剂盒采用改进的SDS 碱裂解法，结合DNA 制备膜选择性地吸附DNA 的方法达到快速纯化质粒DNA 的目的。适合于从120-300 ml 细菌培养物中提取多至500 μg 高纯的质粒DNA，用于测序、体外转录与翻译、限制性内切酶消化、细菌转化等分子生物学实验。
一、试剂盒组成、贮存、稳定性
说明书，耗材：大量DNA制备管、大量滤器。
RNase A：50 mg/ml，室温密闭贮存
Buffer S1：细菌悬浮液，加入RNase A 后，混合均匀，4°C贮存。
Buffer S2：细菌裂解液（含SDS/NaOH）；若出现沉淀，应于37°C温浴溶解并冷却至室温后再室温密闭贮存。
Buffer S3K：中和液，室温密闭贮存。
Buffer B：DNA结合溶液，室温密闭贮存。
Buffer W1：洗涤液，室温密闭贮存。
Buffer W2 concentrate：去盐液。使用前，根据瓶上数量加入乙醇，混合均匀，室温密闭用100%乙醇或95%乙醇。
Eluent：2.5 mM Tris-HCl，pH 8.5。室温密闭贮存。
二、注意事项
1. 细菌过量将影响溶菌及质粒DNA的释放。
2. 在步骤3和步骤4中操作必须温和。剧烈摇晃，将导致基因组DNA的污染。但混合必须充分，否则影响得率。
3. 在加入Buffer S3K时，蛋白质和基因组DNA形成粘稠的白色絮状沉淀，必须充分混合均匀，使凝集块中间也得到充分中和凝结。
4. 将洗脱液或水加热至65°C，有利于提高洗脱效率。
5. DNA分子呈酸性，建议在2.5 mM Tris-HCl，pH 8.5洗脱液中保存。
三、实验准备
1. 第一次使用时，在Buffer W2 concentrate 中按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇。
2. 准备无核酸和核酸酶污染的Tip 头、离心管。
3. 4°C预冷的Buffer S3K和Buffer B。
四、操作步骤
第一次使用时，将RNase A 全部加入Buffer S1 中，混合均匀，4°C 保存。
1. 取120 ml 在LB 培养基中培养过夜的高拷贝数质粒菌液，或250 ml 过夜培养的低拷贝质粒/Cosmid菌液（若使用丰富培养基，菌液体积应减半或更少），≥3,000×g 离心10 min，弃上清。将离心管倒置于纸巾上数分钟，除尽上清。
2. 用10 ml 已加入RNase A 的Buffer S1 悬浮细菌沉淀，悬浮需均匀，不应留有小的菌块。
3. 加10 ml Buffer S2，温和并充分地上下翻转8-10 次混合均匀使菌体充分裂解，直至形成透亮的溶液；此步骤不宜超过5 min。
4. 加入10 ml 4°C 预冷的Buffer S3K，温和并充分地上下翻转10-12 次混合均匀，直至形成紧实的凝集块；室温放置5 min。
5. 加入10 ml 4°C 预冷的Buffer B，温和并充分地上下翻转10-12 次混合均匀；10,000×g 离心（4°C）10 min。
6. 正确连接负压装置，将大量DNA 制备管插到负压装置的插口上。
7. 吸取步骤5 中的混合液，转移到大量滤器中，插入注射器芯，垂直向下缓慢推注至大量DNA 制备管中，开启并调节负压至-25-30 英寸汞柱，缓慢吸尽管中溶液。
8. 保持负压，加12 ml Buffer W1，吸尽管中溶液。
9. 加14 ml Buffer W2，吸尽管中溶液。
* 确认在Buffer W2 concentrate 中已按试剂瓶上的指定体积加入无水乙醇。
10. 将大量DNA 制备管置于50 ml 离心管中，加4 ml Buffer W2 溶液，≥6,000×g 离心5 min。
* 可选步骤：将大量制备管插到负压装置的插口上，最大负压吸引10 min 以确保除尽残留的Buffer W2。
11. 将大量DNA 制备管置于洁净的50 ml 离心管中，在DNA 制备管的基质上加1.5 ml 水或Eluent，室温静置5 min。≥6,000×g 离心5 min 收集质粒DNA。
12. 可选步骤：同样方法，在DNA 制备管的基质上加0.75 ml 水或Eluent，室温静置1 min。≥6,000×g 离心5 min 收集质粒DNA。